Il rilevamento del neuropeptide Y (NPY) si basa principalmente su metodi immunologici, tra cui il test immunoassorbente legato all'enzima (ELISA) per l'analisi quantitativa e l'immunoistochimica (IHC) per la localizzazione dei tessuti.
ELISA è un metodo comunemente utilizzato per la determinazione quantitativa dei livelli di NPY in campioni biologici quali siero umano, plasma, omogenati di tessuti, lisati cellulari e surnatanti di colture cellulari. Solitamente utilizza un principio di inibizione competitiva: gli anticorpi monoclonali NPY vengono rivestiti su una micropiastra e vengono aggiunti sia l'antigene marcato con biotina-che il campione contenente l'antigene bersaglio. L'antigene bersaglio compete con l'antigene marcato per legarsi agli anticorpi. Dopo una fase di lavaggio, vengono aggiunti l'avidina marcata con HRP- e il substrato TMB per lo sviluppo del colore; l'intensità del colore è inversamente proporzionale alla concentrazione di NPY nel campione. Questo metodo offre elevata sensibilità e specificità, con un intervallo di rilevamento tipico compreso tra 24,69 pg/ml e 2000 pg/ml e un limite inferiore di rilevamento inferiore a 9,59 pg/ml.
L'IHC viene utilizzato per localizzare l'espressione e la distribuzione di NPY all'interno delle sezioni di tessuto. Utilizzando anticorpi specifici per legarsi all'NPY nel tessuto e impiegando una reazione cromogenica per la visualizzazione, questo metodo consente l'analisi qualitativa o semi-quantitativa dell'espressione dell'NPY nei diversi tessuti.
